飼養(yǎng)層細(xì)胞是什么
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響，主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時(shí)間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。下面是學(xué)習(xí)啦小編精心為你整理的飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹，一起來(lái)看看。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的介紹
飼養(yǎng)層細(xì)胞就是指一些特定細(xì)胞(如顆粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、輸卵管上皮細(xì)胞等已在體外培養(yǎng)的細(xì)胞)，經(jīng)有絲分裂阻斷劑(常用絲裂霉素)處理后所得的細(xì)胞單層。一般鋪在明膠層上(也可不鋪)。飼養(yǎng)層細(xì)胞大部分可用MEF(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞)。
不論ES細(xì)胞或EG細(xì)胞，原代或初期培養(yǎng)階段一般都需依賴于能分泌他們?cè)隗w外存活增殖所必需的生長(zhǎng)因子的飼養(yǎng)層細(xì)胞。不同類型的飼養(yǎng)層細(xì)胞分泌的生長(zhǎng)因子略有不同，但都要求培養(yǎng)過(guò)程中的飼養(yǎng)層細(xì)胞不分裂不增殖而仍保持代謝活性。是細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)常用的生長(zhǎng)增殖促進(jìn)劑和分化抑制劑。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的影響因素
飼養(yǎng)層的影響，主要體現(xiàn)在飼養(yǎng)層種類、絲裂霉素處理飼養(yǎng)層的時(shí)間、飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)和飼養(yǎng)層細(xì)胞的密度等。動(dòng)物種類不同對(duì)飼養(yǎng)層種類的要求也不同。
飼養(yǎng)層種類
STO PMEF： 對(duì)各種動(dòng)物都較適宜，，但最可靠的方法還是根據(jù)動(dòng)物種類篩選最佳飼養(yǎng)層為宜。有研究表明，PMEF比STO更適合用于小鼠ES(胚胎干細(xì)胞)的培養(yǎng)。
UE(子宮上皮細(xì)胞)
BRL(大鼠肝細(xì)胞)等
動(dòng)物種類
需要經(jīng)過(guò)篩選來(lái)確定最適宜該種動(dòng)物ES分離克隆的飼養(yǎng)層
絲裂霉素處理滋養(yǎng)層的時(shí)間
目前絲裂霉素(常用有絲分裂阻斷劑)處理時(shí)間在小鼠成纖維細(xì)胞上一般要求為：在37攝氏度，5%二氧化碳飽和溫度的條件下處理24h，時(shí)間過(guò)短達(dá)不到預(yù)定目的，成纖維細(xì)胞不能被成功地抑制住，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)則使細(xì)胞老化，活性下降，分泌因子的能力降低，從而直接影響ES細(xì)胞增殖和分化的抑制。同時(shí)處理完的清洗工作也很重要，一般要求用無(wú)鈣鎂PBS沖洗4~5遍，以確保絲裂霉素的徹底清除。
飼養(yǎng)層細(xì)胞的代數(shù)及密度
以小鼠成纖維細(xì)胞為例，選3~5代，密度為10^6-10^7個(gè)/ml為宜，代數(shù)過(guò)低所含雜細(xì)胞太多，代數(shù)過(guò)高則細(xì)胞活力降低。
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