E花環形成的原理是什么

E花環形成的原理是什么

　　E花環你聽說過嗎?是不是以為是什么新型的花環編織方法?E花環是一種花環形成細胞，它的實驗是一種體外檢測人和動物細胞免疫功能的方法，常用于T淋巴細胞計數。你對E花環知道多少?下面由學習啦小編為你詳細介紹。

　　E花環形成的原理：

　　T淋巴細胞表面有綿羊紅細胞(SRBC)的受體(CD2)，存在于95%成熟T淋巴細胞表面，能與綿羊紅細胞結合，經染色后，可見紅色的綿羊紅細胞與中央的藍色淋巴細胞組成玫瑰花瓣狀，形成花環樣，稱為E花環。凡表面粘附有3個或3個以上綿羊紅細胞(SRBC)者為花環形成細胞(即E陽性細胞)。

　　E花環實驗原理：

　　免疫學上用來檢測T細胞數量的一種實驗方法，T細胞表面具有能與綿羊紅細胞(SRBC)表面糖肽結合的受體，稱為E受體(CD2)。CD2 是一種糖蛋白，相對分子質量為30 000～60 000，已證實E受體是人類T細胞所特有的表面標志。當T細胞與SRBC混合后，SRBC便粘附于T細胞表面，呈現花環狀。通過花環形成檢查T細胞的方法，稱為E花環形成試驗。根據花環形成的多少，可測知T細胞的數目，從而間接了解機體細胞免疫功能狀態，判斷疾病的預后，考核藥物療效等。

　　實驗操作方法：

　　1.用分層液密度梯度離心法分離淋巴細胞，計數后，用Hanks液配成107個/ml細胞懸液。

　　2.取0.1 ml淋巴細胞懸液，加入0.1 ml 1% SRBC及0.05 ml滅活小牛血清，混勻。

　　3.37℃靜置5分鐘，500 rpm低速離心5min后，放入冰箱，2小時或過夜。

　　4.取出試管，吸棄上清液，加0.8%戊二醛溶液1 滴，輕輕旋轉混勻，置4℃冰箱固定15分鐘。

　　5.取出后，輕輕旋轉試管，使沉淀細胞重新懸浮;取1滴涂片，自然干燥后，瑞氏染色，高倍下觀察。

　　凡能結合3個SRBC者即為E花環陽性細胞。計數200個淋巴細胞，算出花環形成細胞百分率。

　　實驗注意事項：

　　1.SRBC最好是新鮮的，一般采血后保存在Alsever保存液中，2周內可以用，超過2周SRBC與淋巴細胞的結合能力下降。

　　2.從采血到測定，不得超過4小時，若用分離的淋巴細胞，放置時間也不得超過4小時，否則SRBC受體會自行脫落。同時用錐蟲藍檢查活力，活細胞不少于95%。

　　3.計數前應將沉于管底的細胞予以重懸，但只宜輕緩旋轉試管，使細胞團塊松開即可，不能過猛或強力吹打，否則花環會消失或減少。

　　4.要求全部試驗在室溫(16～23℃)中進行。

　　實驗材料：

　　1.肝素抗凝血2 ml。

　　2.聚蔗糖-泛影葡胺分層液。

　　3.pH7.2～7.4 Hanks液。

　　4.瑞氏染色液。

　　5.0.8%戊二醛溶液(用Hanks液將戊二醛配成0.8%，然后用1 mol/L NaOH將pH調至7.2～7.4)。

　　6.吸收滅活的小牛血清(小牛血清經56℃ 30分鐘滅活后，取1體積壓積SRBC，加2體積滅活小牛血清，混勻后置37℃ 30分鐘，離心沉淀紅細胞，吸取上清，放4℃冰箱保存備用)。

　　7.1% SRBC懸液(無菌脫纖維的綿羊靜脈血100 ml加Alsever保存液50 ml，置4℃冰箱保存，一般不宜超過2周。用前以Hanks液洗3次，1 500轉/分 10分鐘，棄上清，將壓積紅細胞用Hanks液配成1 %SRBC懸液，細胞濃度約為8×107個/ml)。

　　E花環形成實驗臨床意義：

　　E花環值增高

　　見于甲狀腺功能亢進、甲狀腺炎、重癥肌無力、慢性活動性或遷延性肝炎、sle活動期以及器官移植排斥反應等。

　　E花環值減低

　　見于免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫性疾病、某些病毒感染、大面積燒傷、多發性神經炎、淋巴增值性疾病。